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乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸定量檢測(cè)試劑

注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）脫氧核糖核酸(deoxyribose nucleic acid, DNA)定量檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV DNA）定量檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請(qǐng)人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究?jī)?nèi)容，可自行補(bǔ)充。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

二、適用范圍

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，我國(guó)屬乙型肝炎感染地方性流行區(qū)。根據(jù)2006年全國(guó)乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查，我國(guó)的慢性HBV感染者約9300萬(wàn)人，其中慢性乙型肝炎患者約2000萬(wàn)例，每年因乙型肝炎導(dǎo)致的肝硬化和肝癌死亡約30余萬(wàn)例，新發(fā)乙型肝炎病例約50 萬(wàn)～100萬(wàn)例，乙肝防治是當(dāng)前及今后相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)要面臨的重要任務(wù)。

乙型肝炎是血源傳播性疾病，主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。HBV屬嗜肝脫氧核糖核酸（DNA）病毒科（hepadnaviridae），基因組長(zhǎng)約3.2 kb，為部分雙鏈環(huán)狀DNA。急性HBV感染DNA存在先陽(yáng)性后消失的發(fā)展過(guò)程，慢性HBV感染的自然史一般可分為4個(gè)期，即免疫耐受期、免疫清除期、非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期和再活動(dòng)期，其中免疫耐受期HBV DNA滴度較高（大于20 000 IU/ml），免疫清除期表現(xiàn)為血清HBV DNA滴度大于2000 IU/ml，但一般低于免疫耐受期。非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期滴度較低（小于2000 IU/ml），部分再活動(dòng)期患者表現(xiàn)為HBV DNA活動(dòng)性復(fù)制，但并不是所有HBV感染者都經(jīng)歷以上四期。

HBV已發(fā)現(xiàn)有9個(gè)基因型（A～I），每個(gè)基因型又可分為不同亞型，且存在基因型之間的重組現(xiàn)象。我國(guó)已發(fā)現(xiàn)A、B、C、D基因型，中東部地區(qū)以B、C基因型占優(yōu)勢(shì)，其中北方地區(qū)（長(zhǎng)江以北）主要為C2亞型；南方大部分地區(qū)流行株為B2、C2、C1亞型，并有少部分D基因型；西部地區(qū)尤其是新疆地區(qū)以D基因型為主，西部藏族居民中以C/D重組基因型為主；A型和B1亞型罕見(jiàn)。

HBV DNA定量檢測(cè)試劑是指利用包括實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）或其他的分子生物學(xué)方法在內(nèi)的核酸檢測(cè)技術(shù)，以HBV基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)，對(duì)人血清、血漿及其他人體樣本中的HBV DNA進(jìn)行體外定量檢測(cè)的試劑。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可作為乙型肝炎輔助診斷的指標(biāo)之一，還可通過(guò)對(duì)血液中HBV DNA濃度的檢測(cè)可用于HBV感染的輔助診斷、治療適應(yīng)癥的選擇及抗病毒療效的判斷。

本指導(dǎo)原則適用于實(shí)時(shí)熒光PCR方法的HBV DNA定量檢測(cè)試劑，其他類(lèi)同用途的核酸定量檢測(cè)方法可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性確定其中具體內(nèi)容是否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇符合自身方法學(xué)特性的技術(shù)要求或評(píng)價(jià)方法。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

本指導(dǎo)原則不適用于國(guó)家法定血源篩查用HBV DNA檢測(cè)試劑。

三、基本要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)及檢出限等方面寫(xiě)明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）》（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕229號(hào)）和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求》（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕609號(hào)）的相關(guān)要求。

（二）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)原理、試驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕240號(hào)）的要求，境外產(chǎn)品的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕240號(hào)）的要求，下面對(duì)HBV DNA定量檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地制定產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

（1）試劑盒用于定量檢測(cè)人血清、血漿等樣本中的HBV DNA，適用樣本類(lèi)型應(yīng)依據(jù)申報(bào)產(chǎn)品的分析性能評(píng)估和臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。

（2）待測(cè)人群特征介紹：主要為接受抗病毒治療的乙型肝炎患者。

（3）臨床用途：主要通過(guò)對(duì)乙型肝炎患者血中HBV DNA基線(xiàn)水平和變化情況的監(jiān)測(cè)，用于評(píng)估抗病毒治療的應(yīng)答和治療效果監(jiān)測(cè)。

  如有其他用途（如隱匿性感染的輔助診斷）則應(yīng)對(duì)產(chǎn)品適應(yīng)癥人群、預(yù)期用途另行說(shuō)明，并提供與之相應(yīng)的分析性能評(píng)估以及臨床驗(yàn)證等資料。本指導(dǎo)原則內(nèi)容僅針對(duì)治療監(jiān)測(cè)用途進(jìn)行要求。

（4）應(yīng)當(dāng)說(shuō)明該試劑檢測(cè)結(jié)果不得作為患者病情評(píng)價(jià)的唯一指標(biāo)，必須結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)病情進(jìn)行綜合分析。

（5）明確說(shuō)明該檢測(cè)試劑不得用于血源篩查。

2.【主要組成成分】

（1）說(shuō)明試劑盒所包含組分的名稱(chēng)、數(shù)量、比例或濃度等信息，如定量標(biāo)準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性質(zhì)控品含有人源組分，應(yīng)提供其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性；說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

（2） 試劑盒中不包含但該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，說(shuō)明書(shū)中應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱(chēng)、注冊(cè)證號(hào)（如有）及其他相關(guān)信息。

（3）如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱(chēng)、注冊(cè)證號(hào)（如有）以及配套儀器等詳細(xì)信息。

3.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)封穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期。

4.【樣本要求】

（1）樣本收集要求：結(jié)合臨床需要并參照慢性乙型肝炎防治指南（現(xiàn)行版）推薦的采樣要求。

（2）血液樣本應(yīng)當(dāng)說(shuō)明對(duì)采血管及抗凝劑的要求：明確樣本類(lèi)型、采血管和抗凝劑，其他樣本應(yīng)說(shuō)明樣本采集、處理及保存方式。

（3）樣本處理、運(yùn)送及保存：對(duì)血液樣本離心條件的要求，核酸提取前的預(yù)處理、運(yùn)送條件、保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。如有需要應(yīng)對(duì)高于檢測(cè)范圍的樣本稀釋方法進(jìn)行規(guī)定。

5.【適用機(jī)型】注明所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶(hù)操作。

6.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

（1）試劑準(zhǔn)備及配制方法、注意事項(xiàng)。

（2）詳述待測(cè)樣本、相關(guān)校準(zhǔn)品及質(zhì)控品核酸提取的條件、步驟及注意事項(xiàng)。

（3）核酸提取/純化方法的詳細(xì)介紹。

（4）擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

（5）PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。

（6）儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標(biāo)記情況對(duì)待測(cè)基因及內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇。

（7）基線(xiàn)、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法。

（8）校準(zhǔn)方法的描述。

（9）實(shí)驗(yàn)的有效性判斷：試劑盒內(nèi)陰/陽(yáng)性質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)的Ct值要求。

7.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用IU/ml表示，結(jié)合陰、陽(yáng)性質(zhì)控結(jié)果，對(duì)低于檢出限未檢出、低于定量限、檢測(cè)范圍內(nèi)及高于檢測(cè)范圍的檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行界定。

8．【檢驗(yàn)方法的局限性】

（1）本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

（2）不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存及處理過(guò)程均有可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。

（3）明確該試劑僅限于規(guī)定的樣本類(lèi)型及適用機(jī)型。

9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

（1）對(duì)相應(yīng)國(guó)家參考品的符合情況。

（2）最低檢出限及定量限：說(shuō)明試劑不同樣本類(lèi)型的最低檢出濃度和最低定量濃度，簡(jiǎn)單介紹最低檢出限/定量限的確定方法以及對(duì)最低檢出限/定量限驗(yàn)證所采用的基因型。

（3）精密度：精密度參考品的組分、濃度及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)結(jié)果。

（4）線(xiàn)性范圍：確定線(xiàn)性范圍的方法、濃度范圍、相關(guān)系數(shù)等信息。

（5）對(duì)不同基因型的覆蓋：驗(yàn)證該試劑對(duì)HBV不同基因型的檢測(cè)效果。

（6）特異性：

①臨床特異性：應(yīng)采用一定數(shù)量的臨床HBV DNA陰性樣本進(jìn)行驗(yàn)證。

②交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體核酸的驗(yàn)證情況，建議以列表的方式表示經(jīng)過(guò)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體名稱(chēng)、型別、濃度等信息。

③干擾物質(zhì)：樣本中常見(jiàn)干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素等，應(yīng)注明可接受的最高限值。

④藥物影響：常用抗病毒藥物、干擾素等對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如未進(jìn)行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說(shuō)明。

（7）對(duì)比試驗(yàn)研究：簡(jiǎn)要介紹對(duì)比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

10.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑盒內(nèi)校準(zhǔn)品、質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已通過(guò)乙型肝炎表面抗原（HbsAg）、人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體（抗-HIV1/2）、丙型肝炎抗體（抗-HCV）等項(xiàng)目的檢測(cè)為陰性，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

（2）臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》配備設(shè)備及操作人員，應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作。

（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說(shuō)明

擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕229號(hào)和國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕609號(hào)文件的相關(guān)規(guī)定。另外，對(duì)于國(guó)產(chǎn)試劑，應(yīng)參考《中國(guó)生物制品規(guī)程》（2000年版），將擬申報(bào)產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類(lèi)”項(xiàng)中引出該附錄內(nèi)容。附錄中應(yīng)將待測(cè)靶基因區(qū)域，引物/探針來(lái)源及驗(yàn)證情況，各種酶的來(lái)源、特性以驗(yàn)證情況等信息的重點(diǎn)內(nèi)容予以明確。

HBV DNA定量檢測(cè)試劑的注冊(cè)檢測(cè)應(yīng)符合相應(yīng)國(guó)家參考品檢測(cè)要求。產(chǎn)品的性能指標(biāo)應(yīng)與說(shuō)明書(shū)內(nèi)容相符。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

（四）注冊(cè)檢測(cè)

根據(jù)國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕229號(hào)要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類(lèi)產(chǎn)品應(yīng)在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢測(cè)。對(duì)于已經(jīng)有國(guó)家參考品的HBV DNA項(xiàng)目，在注冊(cè)檢測(cè)時(shí)應(yīng)采用相應(yīng)的國(guó)家參考品進(jìn)行。

（五）主要原材料研究資料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、酶、標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)參考品等的選擇與來(lái)源、制備過(guò)程、質(zhì)量分析和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須穩(wěn)定；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供的資料包括：供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

1.企業(yè)內(nèi)部參考品的制備、定值過(guò)程。建議采用滅活病毒的血清/血漿建立參考品，不宜使用質(zhì)粒。

2.核酸分離/純化組分（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。

3.聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）組分的主要材料（包括引物、探針、內(nèi)標(biāo)、各種酶及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)研究資料，主要包括以下內(nèi)容：

（1） 脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP，對(duì)純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。

（2）引物

由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，并對(duì)序列準(zhǔn)確性、純度、穩(wěn)定性、功能性實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證。如為外購(gòu)，應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如聚丙烯酰胺凝膠電泳法（PAGE）結(jié)果或高效液相色譜法（HPLC）分析圖譜。

（3） 探針

特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。合成后經(jīng)PAEG或其他適宜方法純化，在5'-端(和/或3'-端)進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化,純度應(yīng)達(dá)到高效液相色譜純。如為外購(gòu)，應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對(duì)探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC分析。

（4） PCR反應(yīng)所需酶

DNA聚合酶，應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性，如：94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性；尿嘧啶糖基化酶（UNG），具有尿嘧啶糖基化活性，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，應(yīng)對(duì)酶活性有合理驗(yàn)證；應(yīng)提供有關(guān)保存穩(wěn)定性、活性及功能實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證資料。

4.內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品的原料選擇、制備、定值過(guò)程及試驗(yàn)資料。內(nèi)標(biāo)設(shè)置應(yīng)合理，質(zhì)控品宜采用混合陰性人血漿或血清作為基質(zhì)。

5.核酸類(lèi)檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無(wú)脫氧核糖核酸酶（Dnase）和核糖核酸酶（Rnase）污染。

（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

基本生產(chǎn)工藝主要包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過(guò)程應(yīng)對(duì)pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。

生產(chǎn)工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類(lèi)型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)，主要包括以下內(nèi)容：

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.基因位點(diǎn)選擇、PCR方法學(xué)特性介紹。

4. DNA提取純化方法優(yōu)化，建議包含純化步驟，內(nèi)標(biāo)、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均應(yīng)全程參與提取純化，不建議采用煮沸法進(jìn)行DNA提取。

5.確定最佳PCR反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度、樣本量、加樣量及反應(yīng)體積等。樣本量應(yīng)不少于200微升，加樣量和反應(yīng)體積參考相應(yīng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)研究驗(yàn)證后確定。

6.確定PCR各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)的研究資料。

7.對(duì)于基線(xiàn)閾值（threshold）和閾值循環(huán)數(shù)（Ct）確定的研究資料。

8.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件的對(duì)比分析，如果有差異應(yīng)分別詳述。

另外，對(duì)于試劑盒的內(nèi)標(biāo)、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品設(shè)置，建議企業(yè)參考以下要求執(zhí)行：

（1）樣本反應(yīng)管應(yīng)設(shè)置合理的內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）以對(duì)管內(nèi)抑制可能造成的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)標(biāo)的引物、探針和模板的濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線(xiàn)，但又不能對(duì)目的基因的檢測(cè)造成競(jìng)爭(zhēng)性抑制而導(dǎo)致假陰性，對(duì)內(nèi)標(biāo)的Ct應(yīng)有明確的范圍要求。

（2）HBV DNA定量檢測(cè)試劑的質(zhì)控品應(yīng)至少設(shè)置三個(gè)量級(jí)水平的系列質(zhì)控品:臨界陽(yáng)性質(zhì)控品、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。校準(zhǔn)品和質(zhì)控品均應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，以對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。企業(yè)應(yīng)對(duì)各種質(zhì)控品的Ct做出明確的范圍要求。

（七）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來(lái)源等。分析性能評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）文件或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。對(duì)于HBV DNA定量檢測(cè)試劑，建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

1. HBV DNA提取

病毒DNA提取主要有以下目的：富集目的基因濃度、保證目的基因序列的完整性、增加PCR模板溶液均一性、去除PCR抑制物，是決定PCR成敗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，無(wú)論申報(bào)產(chǎn)品是否含有DNA分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)對(duì)核酸提取的環(huán)節(jié)做詳細(xì)的驗(yàn)證。臨床標(biāo)本中可能含有各式各樣的PCR抑制物，因此，對(duì)于DNA提取試劑的選擇，除最大量分離出目的DNA外，還應(yīng)有純化步驟，盡可能去除PCR抑制物。目前常見(jiàn)的DNA分離純化方法和改良方法各有優(yōu)勢(shì)和不足，申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合申報(bào)產(chǎn)品的特性，合理選擇DNA分離/純化試劑，并提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料（提取效率、與后續(xù)試驗(yàn)的配合等）。

2.最低檢出限與定量限（分析靈敏度）

（1）最低檢出限與定量限的確定

建議使用國(guó)際參考品/國(guó)家參考品進(jìn)行梯度稀釋并多次檢測(cè)，將具有95%以上陽(yáng)性檢出率的病毒水平作為最低檢出限。建議最低檢出限應(yīng)不高于30IU/ml。

定量限應(yīng)高于或等于檢出限，將多次（至少10次）測(cè)量的結(jié)果符合試劑準(zhǔn)確度要求的最低病毒水平作為定量限。

（2）最低檢出限和定量限的驗(yàn)證

申報(bào)試劑應(yīng)在最低檢出限或接近最低檢出限的病毒濃度對(duì)不同基因型（至少包括B、C、D型）進(jìn)行驗(yàn)證，總測(cè)試數(shù)不少于60次。定量限的驗(yàn)證應(yīng)對(duì)不同基因型（至少包括B、C、D型）進(jìn)行驗(yàn)證，總測(cè)試數(shù)不少于40次。

企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢出限/定量限驗(yàn)證的各個(gè)病毒株的來(lái)源、型別確認(rèn)及滴度確認(rèn)試驗(yàn)等信息。

3.線(xiàn)性范圍

線(xiàn)性范圍確定的研究應(yīng)使用高值臨床樣本（由可溯源至國(guó)家參考品/國(guó)際參考品的方法定量）進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)♂屢簯?yīng)使用經(jīng)確認(rèn)為陰性的混合人血清或血漿，應(yīng)包含不少于9個(gè)濃度（應(yīng)包含接近最低檢測(cè)限的臨界值濃度），使用至少3個(gè)批次的試劑進(jìn)行試驗(yàn)。通過(guò)評(píng)價(jià)一定范圍內(nèi)的線(xiàn)性關(guān)系及各水平的準(zhǔn)確度確定該產(chǎn)品的線(xiàn)性范圍。

4.準(zhǔn)確度

對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)依次包括：與國(guó)家參考品（和/或國(guó)際參考品）的比對(duì)研究、回收實(shí)驗(yàn)、方法學(xué)比對(duì)等方法，企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。

（1）國(guó)家/國(guó)際參考品驗(yàn)證

此類(lèi)檢測(cè)試劑有相應(yīng)的國(guó)家/國(guó)際參考品，應(yīng)使用國(guó)家/國(guó)際參考品對(duì)試劑進(jìn)行驗(yàn)證，重點(diǎn)觀察對(duì)相應(yīng)參考品檢測(cè)結(jié)果的符合情況。

（2）回收試驗(yàn)。用于評(píng)估定量檢測(cè)方法準(zhǔn)確測(cè)定加入純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對(duì)樣本進(jìn)行3～5次回收試驗(yàn)，取平均值即平均回收率。

回收試驗(yàn)注意事項(xiàng)：

①加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般應(yīng)小于樣本體積的10%；

②盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測(cè)物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平；

③標(biāo)準(zhǔn)物的濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本；

④注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測(cè)樣本一致的基質(zhì)

（3）方法學(xué)比對(duì)

采用參考方法或國(guó)內(nèi)/國(guó)際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類(lèi)試劑作為對(duì)比方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測(cè)一批病人樣品，從測(cè)定結(jié)果間的相關(guān)性了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的一致情況。如顯著相關(guān)，說(shuō)明兩檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)病人標(biāo)本測(cè)定結(jié)果基本相符，對(duì)同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋?zhuān)瑪M申報(bào)試劑與對(duì)比方法相比不會(huì)產(chǎn)生顯著差異結(jié)果。
    在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試劑和對(duì)比試劑進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類(lèi)型、濃度分布范圍并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
    5.精密度

測(cè)量精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性，具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類(lèi)產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

（1）對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除申報(bào)試劑（包括提取組分和聚合酶鏈反應(yīng)組分）本身的影響外，還應(yīng)對(duì)PCR分析儀、操作者、地點(diǎn)等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

（2）合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的連續(xù)檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

（3）用于精密度評(píng)價(jià)的質(zhì)控品應(yīng)至少包括四個(gè)水平:

①陰性質(zhì)控品：不含乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV DNA）的質(zhì)控品，不得檢出陽(yáng)性（n≥20）。

②臨界陽(yáng)性質(zhì)控品：待測(cè)物濃度略高于試劑盒的最低檢出限，陽(yáng)性檢出率應(yīng)高于95%（n≥20）。

③弱陽(yáng)性質(zhì)控品：待測(cè)物濃度呈弱陽(yáng)性（高于定量限濃度1個(gè)數(shù)量級(jí)），陽(yáng)性檢出率為100%且變異系數(shù)（CV）符合標(biāo)準(zhǔn)要求（n≥20）。

④強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品：待測(cè)物濃度呈中度至強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為100%且CV符合標(biāo)準(zhǔn)要求（n≥20）。

6.HBV不同基因型的覆蓋

應(yīng)對(duì)乙肝病毒不同基因型（至少包括B、C、D型）進(jìn)行檢測(cè)，重點(diǎn)考察各基因型病毒樣本的分析靈敏度、準(zhǔn)確性及精密度指標(biāo)，每個(gè)基因型的病毒樣本稀釋成至少3個(gè)濃度水平，對(duì)每水平樣本進(jìn)行重復(fù)測(cè)定。

7.特異性

（1）交叉反應(yīng)

①用于HBV DNA檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類(lèi)主要考慮以下幾方面可能性：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀（推薦種類(lèi)見(jiàn)表1）。

②建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。通常，細(xì)菌感染的水平為10⁶ cfu/ml或更高，病毒為10⁵ pfu/ml或更高。

③申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來(lái)源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。有關(guān)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的信息應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)中有所體現(xiàn)。

表1  用于交叉反應(yīng)研究的微生物（推薦）

（2）干擾物質(zhì)

①潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性物質(zhì)（見(jiàn)表2）和常用的治療藥物如普通IFNα（2a、2b和1b）和聚乙二醇干擾素α（2a和2b）[PegIFNα（2a和2b）]、拉米夫定（lamivudine）、阿德福韋酯（adefovir dipivoxil）、恩替卡韋（entecavir）、替比夫定（telbivudine）等。

②使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物濃度進(jìn)行驗(yàn)證，另外，亦建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(最差條件)條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于常見(jiàn)藥物干擾試驗(yàn)，建議參照相應(yīng)藥物藥代動(dòng)力學(xué)研究確定的治療藥物濃度添加相應(yīng)藥物進(jìn)行干擾驗(yàn)證。

③建議在病毒的檢測(cè)臨界值水平對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾影響進(jìn)行檢測(cè)。

表2  建議用于干擾研究的物質(zhì)（推薦）

*為必須驗(yàn)證的干擾物質(zhì)。

8.溯源性

應(yīng)提交詳細(xì)的溯源性研究資料。企業(yè)制備的企業(yè)內(nèi)部參考品、二級(jí)參考品、用于制備商品化校準(zhǔn)品的儲(chǔ)備液以及不同基因型的陽(yáng)性樣本均應(yīng)能夠溯源至國(guó)家參考品/國(guó)際參考品。使用國(guó)家參考品/國(guó)際參考品為校準(zhǔn)品，應(yīng)用多臺(tái)儀器對(duì)企業(yè)一級(jí)參考品進(jìn)行校準(zhǔn)，以下逐級(jí)對(duì)企業(yè)二級(jí)參考品、校準(zhǔn)儲(chǔ)備液、陽(yáng)性參考品進(jìn)行校準(zhǔn)。

9.其他需注意問(wèn)題

對(duì)于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【適用機(jī)型】項(xiàng)中所列的所有型號(hào)儀器的性能評(píng)估資料。如適用于不同樣本類(lèi)型，應(yīng)提交對(duì)不同樣本類(lèi)型一致性的驗(yàn)證，包括不同抗凝劑、采血管的驗(yàn)證。

（八）參考值（范圍）確定資料

對(duì)于此類(lèi)試劑，正常人群中不應(yīng)檢出HBV DNA，參考值確定資料主要是指Ct的確認(rèn)資料，建議申請(qǐng)人采用受試者工作特征（ROC）曲線(xiàn)的方式對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的臨界值予以確認(rèn)。

（九）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類(lèi)型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性?xún)刹糠謨?nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（十）臨床試驗(yàn)研究

1.研究方法

對(duì)于該類(lèi)試劑已有同類(lèi)產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類(lèi)產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱(chēng)考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。

建議預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇兩種對(duì)比試劑同時(shí)進(jìn)行驗(yàn)證，考察其誤差范圍，選擇其中一種作為正式試驗(yàn)的對(duì)比試劑，另一種可作為第三方試劑。對(duì)比試劑的適用樣本類(lèi)型及檢測(cè)范圍應(yīng)能夠涵蓋考核試劑的樣本及檢測(cè)性能要求，以免造成考核試劑部分性能無(wú)法驗(yàn)證的情況。

對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果不一致（檢測(cè)值差異較大）的樣本應(yīng)采用公認(rèn)較好的第三方試劑進(jìn)行驗(yàn)證。

2.臨床研究單位的選擇

建議申請(qǐng)人在選擇臨床研究單位時(shí)，應(yīng)考慮到各試驗(yàn)單位之間的平行性和一定的地域代表性，臨床研究單位應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和對(duì)比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的對(duì)比試劑應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，同時(shí)方案中應(yīng)明確寫(xiě)明對(duì)于對(duì)比試驗(yàn)研究中測(cè)定結(jié)果不符的樣本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)的第三方試劑或方法。

4.病例選擇及樣本類(lèi)型

臨床試驗(yàn)應(yīng)樣本數(shù)需不少于500例，其中應(yīng)主要選擇乙型肝炎患者樣本（陽(yáng)性樣本），不少于450例。在病例選擇時(shí)應(yīng)考慮到地域性的差別，應(yīng)涵蓋不少于10例D基因型，應(yīng)注重不同藥物治療的乙型肝炎患者。陽(yáng)性樣本應(yīng)覆蓋試劑線(xiàn)性范圍，均勻分布高、中、低值。建議選擇不少于50例的陰性樣本進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，陰性樣本主要考慮可能存在的交叉反應(yīng)情況，應(yīng)選擇其他類(lèi)肝炎病毒感染、其他良性或惡性肝臟疾病患者，以從臨床角度考察其特異性。

臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類(lèi)型應(yīng)為實(shí)際臨床檢測(cè)中常用的樣本類(lèi)型。對(duì)于同時(shí)能夠檢測(cè)血清和血漿樣本的試劑，應(yīng)對(duì)至少50例同一乙型肝炎患者分別采集的血清和血漿樣本進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)研究，陽(yáng)性樣本應(yīng)包括強(qiáng)、中、弱陽(yáng)性及部分陰性樣本。

臨床研究應(yīng)以新鮮樣本為主，如采用庫(kù)存樣本應(yīng)另行說(shuō)明 。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，對(duì)于本類(lèi)產(chǎn)品對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，常用相關(guān)性、線(xiàn)性回歸對(duì)log10滴度結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，考察兩組數(shù)據(jù)之間是否存在相關(guān)性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與對(duì)比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行符合率分析，計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率和總符合率。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果有不一致（檢測(cè)結(jié)果差異較大）的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類(lèi)試劑進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。

7.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫(xiě)

根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)食藥監(jiān)械〔2007〕240號(hào)）的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

（1）臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

① 臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。

② 病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。

③ 樣本類(lèi)型，樣本的收集、處理及保存等。

④ 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

（2） 具體的臨床試驗(yàn)情況

① 申報(bào)試劑和對(duì)比試劑的名稱(chēng)、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息。

② 對(duì)各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況、不同基因型分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

③ 質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。

④ 具體試驗(yàn)過(guò)程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長(zhǎng)期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。

（3） 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

① 數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改。

② 兩組數(shù)據(jù)結(jié)果的相關(guān)性、線(xiàn)性回歸的結(jié)果。

③ 對(duì)相關(guān)性及線(xiàn)性方程的顯著性檢驗(yàn)，驗(yàn)證兩種試劑定量結(jié)果的一致性。

④陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。

⑤以交叉表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)。

另外考慮到對(duì)不同樣本類(lèi)型的檢測(cè)結(jié)果可能存在一定差異，故建議對(duì)不同樣本類(lèi)型分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以對(duì)考核試劑的臨床性能進(jìn)行綜合分析。

（4） 討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

四、名詞解釋

精密度（precision）：在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測(cè)試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測(cè)量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

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